Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型心血管疾病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次用到家兔自身病原基底到用到1同型心血管疾病临床研究病症的令人满意率在成年人时期就有很好的揭示，多个家兔自身病原基底HIV的成年人中会有70%在血清转换后10年内患上心血管疾病，而随访15年的成年人这一%-增大到84%。远比之下，占临床研究1同型心血管疾病一半以上的同型1同型心血管疾病的发病有助于还没有人得到充分的科学研究。

越来越多的人开始适用分期系统来界定1同型心血管疾病的令人满意：个基底在用到多种家兔自身病原基底时离开第1阶段，用到低血糖异常时离开第2阶段，用到病症时离开第3阶段。一些多发家兔自身病原基底HIV的个基底，在1期和2期，令人满意较慢，并发展为发病的1同型心血管疾病。我们在此之前揭示了一第三组在首次检测到多种家兔自身病原基底样本后多于10年无心血管疾病的较快令人满意者，这第三组病症人数少，但构造非常明确。随后，我们发现家兔自身病原基底特异性CD8+T巨噬细胞底物在令人满意亦然快的病症中会理论上不存在，但在近期发病和长期存在的心血管疾病病症中会很容易检测到。这可能表明，与令人满意病症远比，这些病症化脓性底物的调节提高。

以前科学研究表明，尽管调节性T巨噬细胞(Treg)数量较长时间，但心血管疾病病症存在一些系统缺陷，其中会包含对IL-2的底物控制能力减低。此外，心血管疾病病症中会的现象CD4+T巨噬细胞可能对调节更具抵抗性，基底现为现象T巨噬细胞的诱导减弱，自然归因于的Treg和基底外归因于的游离Treg，以及病原基底经历的CD4+T巨噬细胞中会IL-2底物减弱。本科学研究的目的是揭示了CD4+调节性T巨噬细胞(Treg)在这群人亦然亦然快令人满意者中会的构造，他们的平均年纪为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX科学研究是一项以老年人必要性将的斜向科学研究，在21岁以下就诊的病症亲属中会检查1同型心血管疾病的危险因素。我们在此之前揭示了长期亦然快令人满意者的构造，他们保持多重家兔自身病原基底HIV超过10年，但没有人用到心血管疾病的临床研究病症，慢性或非性功能化脓性。随后，10名再次保持无心血管疾病并愿意提供大量基底内样本的亦然快令人满意者纳入T和B巨噬细胞系统科学研究。在目前的科学研究中会，8名慢令人满意者(SP第三组)，中会位年纪43岁(31-72岁)，18 - 32岁中间的家兔自身病原基底HIV。所有的旁观者都正处于1同型心血管疾病令人满意的1期，尽管一些人随后失去了家兔自身病原基底对某些病原基底的HIV底物，然而，一名病症从未正处于2期多于6年，但没有人用到临床研究病症，一名病症被治疗为心血管疾病，该受试者72岁，在采集实验样本时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据科学研究中会对该NADP顺利完成了单独评量。分离外周血单个连锁反应巨噬细胞(PBMCs)，采用多参数流式巨噬细胞术和T巨噬细胞诱导试验评量NADP中会Treg的阈值、环境因素和系统。适用FlowSOM和CITRUS(聚类解剖、表征和回归)顺利完成无指导聚类科学研究，评量Treg环境因素。

结果：与身心健康NADP远比，来自慢令人满意基底的遗忘CD4+T巨噬细胞的指导聚类揭示，激已逝的遗忘CD4+ Treg阈值增大，与糖皮质激素游离的TNFR相关病原基底(GITR)强调增大有关。一名HbA1c升高的病症与令人满意亦然快者和匹配的对照第三组远比，Treg磬有所不同。系统科学研究表明，与身心健康NADP远比，来自亦然快令人满意基底的Treg依赖性的CD4+现象T巨噬细胞诱导明显损伤。基底现为对现象CD4+T巨噬细胞CD25和CD134强调的诱导增大。

布1 深入的环境因素科学研究揭示，CD4+Treg亚同型在慢令人满意字段中会增大。由FlowSOM转化的Treg二楼，有数在来自所有NADP的已逝CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据标明物强调解剖出10个元簇:遗忘T巨噬细胞_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;遗忘T cell_4;CD49b遗忘T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +遗忘T巨噬细胞;文件系统Treg_1;文件系统Treg_2;文件系统Treg_3;和文件系统Treg_4。(a)适用9个不同Treg标明转化的10个元簇的MST。每个路由器代表一个空降兵(100个空降兵)，更大的元空降兵(10个元空降兵)在路由器第三组周围图例。每个路由器中会的饼布回应单个标明的强调级别。(b)每个元聚类的热布，以揭示整基底标明强调。(c, d)为HD第三组(c)和SP第三组(d)转化布，以及FlowSOM标记的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对来说金属量为每个metacluster箱直通布(金属量> 0.05%)确定为HD和SP第三组:文件系统Treg_2 (e),文件系统Treg_3 (f),文件系统Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +遗忘T巨噬细胞(h)、遗忘T cell_1(i),遗忘T cell_2 (j),遗忘T cell_3 (k) n d CD49b遗忘T巨噬细胞(l)。粉红色带子代表理应SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对小写秩检验。此键适用于布形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

布2 适用CITRUS的预测模同型证实，Treg阈值的增大是令人满意亦然快的标识。分级门控(a - f)和柑橘科学研究(g-k)比较SP旁观者和匹配的HD旁观者在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群基底的代表性布。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR强调顺利完成分离，模拟FlowSOM群基底。(b) HD(黑点)和SP(黑斑)第三组以及NADPSP 606(粉红色)中会CD25+ cd127的阈值概要布。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控偏序的箱直通布;(c) HLA-DRloGITR−(文件系统Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(文件系统Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(文件系统Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+文件系统T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3强调强度图例，箭头突出的簇被标记为SP和HD字段中间的不同。(j)箱直通布揭示了在SP(黑斑)和HD(灰点)第三组中会，CITRUS遗忘Treg_3和Treg_4的相对来说金属量(%-)。(k)缩放揭示每个簇的环境因素(粉红色)和Treg标明相对来说强调与历史背景强调(深蓝色);上列，文件系统Treg_3;下面一行，文件系统Treg_4。历史背景与所有其他簇中会标明的强调有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对小写秩检验

布3 与身心健康献血者远比，令人满意亦然快者遗忘treg的GITR增大。每个遗忘CD4+T巨噬细胞元簇(遗忘T巨噬细胞_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;CD49b +遗忘T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +遗忘T巨噬细胞;文件系统Treg_2;文件系统Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个强调标明的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)字段的强调热布(sp606不包含在内)。(c,d)遗忘Treg_4元簇中会所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(粉红色)的FlowSOM GITR强调串联，揭示缩放(c)和概要布(d)。Wilcoxon配对小写秩和检验，p< 0.07(粉红色)所有NADP包含，p< 0.05(深蓝色)NADPSP 606和匹配的HD不包含在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR强调，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(粉红色)串联，揭示缩放(e)和概要布(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对小写秩检验

布4 来自亦然快令人满意的CD4+ treg巨噬细胞操控现象CD4+T巨噬细胞的控制能力减低。SP第三组用深蓝色的直通和带子回应，HD第三组用白色的直通和带子回应，粉红色的直通/带子回应NADPsp606。适用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞顺利完成分选。CD4+CD25−(需要的话者)被标明为CFSE, Treg按观察的%-试样。用抗CD3 /28微珠已逝化巨噬细胞，指导3同月顺利完成流式巨噬细胞术检测。(a-d)与CD4+需要的话者相对来说应的treg指导(自基底)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者指导。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE诱导一般而言(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱导一般而言。适用HIV对照(激已逝的响应巨噬细胞含treg)计算诱导一般而言。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差科学研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

布5 现象CD4+T巨噬细胞对亦然快令人满意的T巨噬细胞已逝化的诱导更敏感。SP第三组用深蓝色的直通和带子回应，HD第三组用白色的直通和带子回应，粉红色的直通/带子回应NADPsp606。适用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞顺利完成分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel标明，treg按观察的%-试样。用抗CD3 /28微珠已逝化巨噬细胞，指导3同月顺利完成流式巨噬细胞术(CD25反染)和巨噬STAT科学研究。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者共同指导。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE诱导百份(b)。(c,d) CD25诱导百份(c)和CD134诱导百份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共指导中会的强调。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差科学研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

推论：我们推断的推论是，来自亦然快令人满意子的已逝化遗忘CD4+Treg在GITR强调中会得到了扩展和丰富，强调了必要性科学研究Treg在1同型心血管疾病安全性个基底中会的异质性的必要性。

原文说是：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28